本发明公开了一种用于目的基因干扰的RNA片段及其应用。本发明提供了一种用于干扰目的基因的RNA,为将miR160前体序列中的miR160序列替换为干扰目的基因RNA片段甲,且将所述miR160前体序列中的miR160序列的反向互补序列替换为干扰目的基因RNA片段甲的反向互补序列,得到RNA。本发明的实验证明,本发明将沉默GUS基因表达的干扰片段替换miR160前体序列中的miR160序列得到amiRNA‑GUS;将其导入植物中,利用GUS染色,通过肉眼观察,验证了amiRNA‑GUS载体的有效性,该方法简单有效。