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本发明涉及棉花品种鉴别领域，具体而言，涉及鉴定棉花闭花授粉材料的引物对、试剂盒以及方法。鉴定棉花闭花授粉材料的引物对，包括以下引物对中的任一种或多种：NAU2173引物对、NAU2343引物对、NAU7024引物对、TMB1638引物对、BNL3875引物对、HAU0979引物对、NAU1102引物对、NAU6601引物对、NAU2251引物对、DPL0133引物对。本发明针对陆地棉26条染色体选择180对引物(平均每条染色体上最少3对引物)进行SSR PCR扩增，将闭花授粉材料与多个普通棉花品种进行比较，筛选得到这些特异性引物对。这些引物对特异性强，检测结果稳定可靠。