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本发明提供了一种棉花低温调节剂及其制备方法和使用方法，本发明提供的棉花低温调节剂中24‑表油菜素内酯有助于提高棉苗耐低温能力；在乙醇的溶解作用下，确保24‑表油菜素内酯和氮酮充分溶解于水中，进而有助于各组分以溶液的形式被棉苗吸收。氮酮起到渗透剂作用，可促进棉花叶片对该低温调节剂的吸收，使得24‑表油菜素内酯等其他组分渗入棉花叶片中，与吐温和有机硅共同提高该低温调节剂的药效，进而提高棉苗的低温抵抗力。实施例的结果表明，本发明提供的棉花低温调节剂可以提高棉花苗期的耐低温能力，减缓或避免低温对棉苗细胞膜的伤害，缓解低温对叶绿素的破坏，进而使棉苗在低温胁迫下保持相对较高的光合能力，从而促进植物生长。